Полиакриламидті гельдік электрофорез
Гель электрофорезі – ДНҚ, РНҚ және белоктар сияқты макромолекулаларды бөлуге мүмкіндік беретін биологиялық пәндер бойынша зертханалардағы іргелі әдіс.Әртүрлі бөлу орталары мен механизмдері осы молекулалардың ішкі жиындарын олардың физикалық сипаттамаларын пайдалану арқылы тиімдірек бөлуге мүмкіндік береді.Әсіресе ақуыздар үшін полиакриламидті гельдік электрофорез (PAGE) жиі таңдау әдісі болып табылады.
PAGE – ақуыздар сияқты макромолекулаларды олардың электрофорездік қозғалғыштығына, яғни талданатын заттардың қарама-қарсы зарядты электродқа қарай жылжу қабілетіне қарай бөлетін әдіс.PAGE-де бұл молекуланың зарядымен, өлшемімен (молекулалық массасы) және пішінімен анықталады.Аналиттер полиакриламидті гельде түзілген кеуектер арқылы қозғалады.ДНҚ мен РНҚ-дан айырмашылығы, ақуыздар құрамындағы аминқышқылдарына байланысты зарядталады, бұл олардың жұмыс істеу жолына әсер етуі мүмкін.Аминқышқылды жолдар сонымен қатар олардың көрінетін мөлшеріне әсер ететін қайталама құрылымдарды құра алады, демек, олардың кеуектер арқылы қалай қозғала алатындығына әсер етеді.Сондықтан кейде өлшемін дәлірек бағалау қажет болса, оларды сызықтық ету үшін ақуыздарды электрофорезге дейін денатурациялау қажет болуы мүмкін.
SDS БЕТІ
Натрий-додецилсульфаты полиакриламидті гельдік электрофорез – массасы 5-тен 250 кДа-ға дейінгі ақуыз молекулаларын бөлу үшін қолданылатын әдіс.Белоктар тек олардың молекулалық салмағына қарай бөлінеді.Белок үлгілерінің меншікті зарядтарын бүркемелейтін және оларға ұқсас зарядтың массаға қатынасын беретін гельдерді дайындауға анионды беттік белсенді зат натрий додецил сульфаты қосылады.Қарапайым сөзбен айтқанда, ол белоктарды денатурациялайды және оларға теріс заряд береді.
Native PAGE
Native PAGE - белоктарды бөлу үшін денатуратталмаған гельдерді пайдаланатын әдіс.SDS PAGE-тен айырмашылығы, гельдерді дайындауда денатурациялаушы агент қосылмайды.Нәтижесінде белоктардың бөлінуі белоктардың заряды мен өлшеміне қарай жүреді.Бұл техникада белоктардың конформациясы, қатпарлануы және аминқышқылдық тізбектері бөлуге тәуелді факторлар болып табылады.Бұл процесте белоктар зақымданбайды және оларды бөлу аяқталғаннан кейін қалпына келтіруге болады.
Полиакриламидті гельдік электрофорез (PAGE) қалай жұмыс істейді?
PAGE-тің негізгі принципі - электр тогының көмегімен полиакриламидті гельдің тесіктерінен өткізу арқылы талданатын заттарды бөлу.Бұған жету үшін акриламид-бисакриламид қоспасы аммоний персульфатының (APS) қосылуы арқылы полимерленеді (полиакриламид).Тетраметилэтилендиаминмен (TEMED) катализденетін реакция аналиттер қозғала алатын кеуектері бар тор тәрізді құрылымды құрайды (2-сурет).Гельдің құрамына кіретін жалпы акриламидтің пайызы неғұрлым жоғары болса, кеуектер соғұрлым кішірек болады, демек, олардан өтетін ақуыздар аз болады.Акриламидтің бисакриламидке қатынасы да кеуектер мөлшеріне әсер етеді, бірақ бұл жиі тұрақты болып қалады.Кеуектің кішірек өлшемдері сонымен қатар кішкентай ақуыздардың гель арқылы қозғалу жылдамдығын азайтады, олардың ажыратымдылығын жақсартады және ток қолданылған кезде буферге тез ағып кетуіне жол бермейді.
Полиакриламидті гельді электрофорезге арналған жабдық
Гельдік электрофорез жасушасы (бактер/камералар)
Полиакриламидті гельдік электрофорезге (PAGE) арналған гель цистернасы агарозды гельге арналған ыдыстан ерекшеленеді.Агароз гелі ыдысы көлденең, ал PAGE ыдысы тік.Тік электрофорез ұяшығымен (бактер/камералар) жұқа гель (әдетте 1,0 мм немесе 1,5 мм) екі шыны пластинаның арасына құйылады және гельдің түбі бір камерадағы буферге, ал үстіңгі жағы буферге батырылатындай етіп орнатылады. басқа камерада.Ток қолданылғанда, буфердің аз мөлшері гель арқылы жоғарғы камерадан төменгі камераға ауысады.Құрастырудың тік күйде тұруын қамтамасыз ету үшін күшті қысқыштармен жабдық біркелкі салқындату арқылы гельдің жылдам жүруін жеңілдетеді, нәтижесінде айқын жолақтар пайда болады.
Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. (Liuyi Biotechnology) полиакриламидті гель электрофорез жасушаларының (цистерналар/камералар) өлшемдерінің ауқымын шығарады.DYCZ-20C және DYCZ-20G үлгілері ДНҚ секвенциясын талдауға арналған тік электрофорез жасушалары (цистерналар/камералар) болып табылады.Кейбір тік электрофорез ұяшықтары (цистерналар/камералар) DYCZ-24DN, DYCZ-25D және DYCZ-25E үлгілері сияқты тазарту жүйесімен үйлесімді, Батыс Blotting жүйесінің DYCZ-40D, DYCZ-40G және DYCZ-40F үлгілерімен үйлесімді, белок молекуласын гельден мембранаға тасымалдау үшін қолданылады.SDS-PAGE электрофорезінен кейін Western Blotting - ақуыз қоспасындағы белгілі бір ақуызды анықтау әдісі.Бұл тазарту жүйелерін эксперименттік талаптарға сәйкес таңдауға болады.
Электрофорезді қуат көзі
Гельді іске қосу үшін электрмен қамтамасыз ету үшін сізге электрофорезді қуат көзі қажет.Liuyi Biotechnology компаниясында біз барлық қолданбалар үшін электрофорезді қуат көздерінің ауқымын қамтамасыз етеміз.Тұрақты кернеуі мен тогы жоғары DYY-12 және DYY-12C моделі электрофорездің жоғары кернеу талабын қанағаттандыра алады.Оның стенд, уақыт, VH және қадамдық қолдану функциясы бар.Олар IEF және ДНҚ секвенирлеуші электрофорезді қолдану үшін өте қолайлы.Жалпы ақуыз және ДНҚ электрофорезін қолдану үшін бізде DYY-2C, DYY-6C, DYY-10 және т.б. үлгілері бар, олар электрофорез жасушалары (цистерналар/камералар) бар ыстық сату қуат көздері болып табылады.Оларды орта және төмен вольтты электрофорезді қолдану үшін қолдануға болады, мысалы, мектеп зертханасында, аурухана зертханасында және т.б.Қуат көздеріне арналған басқа модельдер, біздің веб-сайтқа кіріңіз.
Liuyi брендінің Қытайда 50 жылдан астам тарихы бар және компания бүкіл әлем бойынша тұрақты және жоғары сапалы өнімдерді ұсына алады.Жылдар бойы даму арқылы ол сіздің таңдауыңызға лайық!
Біз туралы қосымша ақпарат алу үшін электрондық пошта арқылы бізге хабарласыңыз[электрондық пошта қорғалған] or [электрондық пошта қорғалған].
Анықтамалар Полиакриламидті гель электрофорезі дегеніміз не?
1. Карен Стюард PhD Полиакриламидті гель электрофорезі, ол қалай жұмыс істейді, техника нұсқалары және оның қолданылуы
Хабарлама уақыты: 23 мамыр 2022 ж