Біз өткен аптада целлюлоза ацетаты мембраналық электрофорезді қолдану туралы бірнеше ойлармен бөлістік және осы тақырыпты бүгін сіздің анықтамаңыз үшін аяқтаймыз.
таңдау Буфер концентрациясы
Целлюлоза ацетаты мембраналық электрофорезде қолданылатын буфер концентрациясы әдетте қағаз электрофорезінде қолданылатыннан төмен. Жиі қолданылатын рН 8,6Bарбитальды буфер әдетте 0,05 моль/л мен 0,09 моль/л диапазонында таңдалады. Концентрацияны таңдау кезінде алдын ала анықтау жүргізіледі. Мысалы, электрофорез камерасындағы электродтар арасындағы мембраналық жолақтың ұзындығы 8-10см болса, мембрана ұзындығының сантиметріне 25В кернеу қажет, ал токтың қарқындылығы мембрана енінің сантиметріне 0,4-0,5 мА болуы керек. Егер электрофорез кезінде бұл мәндерге қол жеткізілмесе немесе асып кетсе, буфер концентрациясын арттыру немесе сұйылту керек.
Тым төмен буфер концентрациясы жолақтардың жылдам қозғалуына және жолақ енінің ұлғаюына әкеледі. Екінші жағынан, шамадан тыс жоғары буфер концентрациясы жолақ миграциясын бәсеңдетеді, бұл белгілі бір бөлу жолақтарын ажыратуды қиындатады.
Айта кету керек, целлюлоза ацетаты мембраналық электрофорезде токтың айтарлықтай бөлігі үлгі арқылы өтеді, ол айтарлықтай жылуды тудырады. Кейде таңдалған буфер концентрациясы орынды деп есептелуі мүмкін. Дегенмен, қоршаған орта температурасының жоғарылауы жағдайында немесе жоғары кернеуді пайдаланған кезде, жылу әсерінен судың булануы күшейіп, буфер концентрациясының шамадан тыс жоғары болуына және тіпті мембрананың кебуіне әкелуі мүмкін.
Үлгі көлемі
Целлюлоза ацетаты мембраналық электрофорезде үлгі көлемінің мөлшері әртүрлі факторлармен, соның ішінде электрофорез жағдайларымен, үлгінің өзінің қасиеттерімен, бояу әдістерімен және анықтау әдістерімен анықталады. Жалпы принцип ретінде анықтау әдісі неғұрлым сезімтал болса, үлгі көлемі соғұрлым аз болуы мүмкін, бұл бөлу үшін тиімді. Үлгі көлемі шамадан тыс болса, электрофоретикалық бөлу үлгілері анық болмауы мүмкін және бояу да көп уақытты қажет етеді. Алайда, элюционды колориметриялық анықтау әдістерін пайдалана отырып, бөлінген боялған жолақтарды сандық талдау кезінде үлгі көлемі тым аз болмауы керек, себебі бұл белгілі бір компоненттер үшін сіңірілу мәндерінің төмендеуіне әкелуі мүмкін, бұл олардың мазмұнын есептеу кезінде үлкен қателіктерге әкеледі. Мұндай жағдайларда үлгі көлемін тиісті түрде көбейту керек.
Әдетте, үлгіні қолдану жолының әрбір сантиметріне қосылған үлгі көлемі 0,1-ден 5 мкл-ге дейін ауытқиды, бұл 5-тен 1000 мкг-ға дейінгі үлгі мөлшеріне балама. Мысалы, қан сарысуындағы ақуызды электрофорездің әдеттегі талдауында қолдану жолының әрбір сантиметріне қосылған үлгі көлемі әдетте 1 мкл-ден аспайды, бұл 60-80 мкг протеинге тең. Дегенмен, липопротеидтерді немесе гликопротеиндерді бірдей электрофорез әдісін қолданып талдау кезінде үлгі көлемін сәйкесінше ұлғайту қажет.
Қорытындылай келе, ең қолайлы үлгі көлемін алдын ала эксперименттер сериясы арқылы нақты шарттар негізінде таңдау керек.
Бояу ерітіндісін таңдау
Целлюлоза ацетаты мембраналық электрофорездегі бөлінген жолақтар әдетте анықтау алдында боялады. Әртүрлі үлгі компоненттері әртүрлі бояу әдістерін қажет етеді және целлюлоза ацетаты мембраналық электрофорезге сәйкес бояу әдістері сүзгі қағазына толығымен қолданылмауы мүмкін.
Бояу ерітіндісін таңдаудың үш негізгі қағидасы барцеллюлоза ацетат мембранасы. Біріншіден,Спиртте еритін бояғыштарға қарағанда суда еритін бояғыштарға артықшылық беру керек, соңғысының бояу ерітіндісінің әсерінен мембрананың шөгуін және деформациясын болдырмас үшін. Бояудан кейін мембрананы сумен шаю және бояу ұзақтығын азайту маңызды. Әйтпесе, мембрана бұралып немесе кішірейіп кетуі мүмкін, бұл кейінгі анықтауға әсер етеді.
Екіншіден, үлгі үшін бояғыштығы күшті бояғыштарды таңдаған дұрыс. Сарысу ақуыздарының целлюлоза ацетаты мембраналық электрофорезінде қан сарысуының әртүрлі ақуыз компоненттеріне күшті бояғыштығы мен тұрақтылығына байланысты қара амин қара 10В әдетте қолданылады.
Үшіншіден, сенімді сапалы бояғыштарды таңдау керек. Кейбір бояғыштар бірдей атауға ие болғанымен, бояудан кейін ерекше қараңғы фонға әкелетін қоспаларды қамтуы мүмкін. Бұл тіпті бастапқыда жақсы бөлінген жолақтарды бұлдыратып, оларды ажыратуды қиындатады.
Соңында, бояу ерітіндісінің концентрациясын таңдау маңызды. Теориялық тұрғыдан алғанда, бояу ерітіндісінің жоғары концентрациясы үлгі компоненттерін мұқият бояуға және жақсы бояу нәтижелеріне әкелетін сияқты көрінуі мүмкін. Алайда бұлай емес. Үлгі компоненттері мен бояғыш арасындағы байланыстыру аффинділігі белгілі бір шекке ие, ол бояу ерітіндісінің концентрациясының жоғарылауымен жоғарыламайды. Керісінше, бояу ерітіндісінің шамадан тыс жоғары концентрациясы бояуды ысырап етіп қана қоймайды, сонымен қатар анық фонға қол жеткізуді қиындатады. Сонымен қатар, түс қарқындылығы белгілі бір максималды мәнге жеткенде, бояғыштың сіңіру қисығы, әсіресе сандық өлшемдерде сызықтық қатынасты ұстанбайды. Целлюлоза ацетаты мембраналық электрофорезде бояу ерітіндісінің концентрациясы әдетте қағаз электрофорезінде қолданылатындан төмен.
Бейжің Люйи биотехнологиясы туралы білу керек мәліметтер's целлюлоза ацетат мембранасыэлектрофорез цистернасы және оны электрофорезге қолдану үшін мына жерге кіріңіз:
лЦеллюлоза ацетаты мембранасы арқылы сарысу ақуызын бөлуге арналған тәжірибе
лЦеллюлоза ацетаты мембраналық электрофорез
лЦеллюлоза ацетаты мембраналық электрофорезді пайдалану кезінде бірнеше ойларды есте сақтау керек (1)
Егер сізде біздің өнімдерді сатып алу жоспары болса, бізге хабарласудан тартынбаңыз. Сіз бізге электрондық пошта арқылы хабарлама жібере аласыз[электрондық пошта қорғалған]немесе[электрондық пошта қорғалған], немесе +86 15810650221 нөміріне қоңырау шалыңыз немесе Whatsapp +86 15810650221 немесе Wechat: 15810650221 нөмірін қосыңыз.
Анықтама:Ли мырзаның электрофорезі (Екінші басылым).
Жіберу уақыты: 06 маусым 2023 ж