Целлюлоза ацетаты мембраналық электрофорез арқылы сарысу ақуызын бөлуге арналған тәжірибе

Принцип

Целлюлоза ацетаты пленкасының электрофорезі – тірек ретінде целлюлоза ацетаты қабықшасын пайдаланатын электрофорез әдісі.Электр өрісінің әсерінен зарядталған бөлшектердің қарама-қарсы электродқа қарай жылжу құбылысы электрофорез деп аталады.Әрбір ақуыздың белгілі бір изоэлектрлік нүктесі болғандықтан, ақуызды рН изоэлектрлік нүктесінен төмен ерітіндіге салса, ақуыз оң зарядталып, теріс электродқа қарай жылжиды.Керісінше, ол оң полюске жылжиды.Белок молекулаларының электр өрісінде қозғалу жылдамдығы олардың зарядына, молекулалардың пішіні мен өлшеміне байланысты болғандықтан, әртүрлі белоктарды электрофорез арқылы бөлуге болады.Сарысуда әр түрлі белоктар бар, олардың барлығында рН7,5 немесе одан төмен изоэлектрлік нүктелер бар.Сарысуды электрофорез жүргізу үшін рН 8,6 буферіне қойғанда, сарысудағы барлық ақуыздар теріс зарядталады және электр өрісінде оң жаққа қарай жылжиды.Қан сарысуындағы әртүрлі ақуыздардың зарядтары бірдей рН-да әртүрлі болғандықтан, молекулалық бөлшектердің мөлшері әр түрлі, демек миграция жылдамдығы да әртүрлі және олар электрофорез арқылы бөлінеді.Сарысу ақуыздарының изоэлектрлік нүктелері мен молекулалық салмағы төмендегі кестеде көрсетілген:

Тәжірибе қан сарысуындағы әртүрлі ақуыздарды тірек орта ретінде целлюлоза ацетаты мембранасымен (қысқартылған CAM) бөлу болып табылады.CAM көбіктенген ілмектердің бір түріeжақсы біркелкі пленка, ал қалыңдығы 0,1 мм-1,5 мм, ол белгілі бір суды сіңіреді.

CAM электрофорезіне арналған материалдар, аспаптар және реагенттер

Үлгілер:сау адамның қан сарысуы

Құрал:қуат көзі DYY-6C, электрофорез цистернасы DYCP-38C, жоғары үлгіні жүктеу WD-9404

Реагенттер

1) целлюлоза ацетатты мембрана 7X9см

2) PH 8,6 барбитол буферінің ерітіндісі (иондық күші 0,05-0,09, ол 0,06 тид уақыт): 1,84 г диэтил барбитур қышқылын алыңыз, содан кейін 1,03 г диэтил натрий пентобарбиталын алыңыз, еріту үшін қыздыру үшін дистилденген суды қосыңыз және жасаңыз. 1000 мл дейін;

3) Бояу: Ponceau S 0,2g, Trichloroacetic 3g, 100 мл тазартылған су қосыңыз;

4) TBS/T немесе PBS/T: 45 мл 95% этанол, 5 мл мұзды сірке қышқылы, 50 мл тазартылған су қосыңыз;

5) Тазалау ерітіндісі: 70 мл сусыз этанол, 30 мл мұзды сірке қышқылы.

Эксперимент әдісіd

1) Мембрананы дайындаңыз: мембрананы барбитол буферінің ерітіндісіне 30 минуттан 8 сағатқа дейін батырыңыз және оны шығарыңыз, қосымша ерітіндіні сіңіргіш қағазбен алыңыз.

2) Үлгілерді жүктеу: мембрананың өрескел жағы мен тегіс жағын ажыратып, өрескел жағында үстіңгі ұшына дейін 1,5 см қашықтықта сызықты белгілеңіз.Үлгілерді өрескел жағына жоғары үлгіні жүктеу құралымен жүктеңіз.Ескертпе: Үлгілерді мембрананың өрескел жағына салу керек.Сарысу үлгілері мембранаға толық енгеннен кейін мембрананы төңкеріп, дөрекі жағын (үлгілері бар) төмен қаратып резервуарға қойып, үлгілері бар ұшын теріс электродқа салады.

3) Электрофорез: Ток көзін қосыңыз, 0,4～0,6м А/см мембрана, жұмыс уақыты 30-45 мин.Электрофорезді жүргізгеннен кейін қуатты өшіріңіз.

4) Дақ және тазалау: резервуардан мембрананы шығарып, суға батырыңызit бояу ерітіндісіне 5 минут салып, содан кейін фон түсі анық болғанша тазалау ерітіндісінде 3-4 рет қайта-қайта тазалаңыз.Сарысу ақуыздары жолақтарда көрсетілуі керек және әдетте бес аймақ бар, олар белгіленген сызыққа дейін жоғарғы ұшын құрайды, Альбумин, α1-глоулин, α2-глоулин, β-глоулин, γ-глоулин.

5) Сақтау: құрғақ электрофорезді қоютоптазалау ерітіндісінде 10-15 минут ұстаңыз, содан кейін оны шығарып, таза стаканға жабыстырыңыз, ол кепкеннен кейін мөлдір пленкаға айналады.топ.

ЭкспериментНәтиже

Сарысу үлгілерінің бөліну әсері жақсы және жолақты қалдық құбылысы жоқ.Нәтижелердің қайталануы сынақ процедуралары мен экспериментатордың әдістеріне байланысты өзгереді және қайталану мүмкіндігі жоғары.

Қорытынды

жылдам клиникалық электрофорезді анықтау жүйесі (Электрофорез цистернасыDYCP-38C,нәр берушіDYY-6C және жоғары үлгіні жүктеу WD-9404) біздің шығарғанкомпаниясы Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltdэксперименттік талаптарға сәйкес келеді,жәненәтижелер қайталанатын, қарапайым және жылдам, қолайлыоқытузерттеу.

Пекин ЛюйиBiotechnology Co.,Ltd өмір туралы ғылым саласына арналған электрофорез өнімдерін өндіруге маманданған.Қытайда 50 жылдан астам тарихы бар және компания бүкіл әлем бойынша тұрақты және жоғары сапалы өнімдерді ұсына алады.Жылдар бойы даму арқылы ол сіздің таңдауыңызға лайық!

Біз қазір серіктестерді іздейміз, OEM электрофорез цистернасы да, дистрибьюторлар да құпталады.

Біз туралы қосымша ақпарат алу үшін электрондық пошта арқылы бізге хабарласыңыз[электрондық пошта қорғалған]немесе[электрондық пошта қорғалған].