Эксперимент принципі
Гемоглобин электрофорезі әртүрлі қалыпты және қалыпты емес гемоглобиндерді анықтауға және растауға бағытталған.
Әртүрлі гемоглобин типтерінің зарядтары мен изоэлектрлік нүктелері әртүрлі болғандықтан, белгілі бір рН буферлік ерітіндіде гемоглобиннің изоэлектрлік нүктесі буферлік ерітіндінің рН мәнінен төмен болғанда, гемоглобин теріс заряд алып, электрофорез кезінде анодқа қарай жылжиды. Керісінше, оң зарядты гемоглобин катодқа қарай жылжиды.
Белгілі бір кернеу кезінде және белгілі бір электрофорез уақытынан кейін зарядтары мен молекулалық салмағы әртүрлі гемоглобиндер әртүрлі миграция бағыттары мен жылдамдығын көрсетеді. Бұл әртүрлі аймақтарды бөлуге мүмкіндік береді және әр түрлі гемоглобиндердің мөлшерін анықтау үшін осы аймақтарда кейінгі колориметриялық немесе электрофоретикалық сканерлеу талдауын жүргізуге болады. Ең жиі қолданылатын әдіс - рН 8,6 целлюлоза ацетаты мембраналық электрофорез.
Цитоплазмада гликоген немесе полисахаридтер (мысалы, мукополисахаридтер, мукопротеидтер, гликопротеидтер, гликолипидтер және т.б.) құрамында болатын этиленгликоль топтары (CHOH-CHOH) периодты қышқылмен тотығады және альдегидтік топтарға (CHO-CHO) айналады. Бұл альдегид топтары түссіз күлгін-қызыл Шифф реагентімен қосылып, жасушада полисахаридтер бар жерде тұндыратын күлгін-қызыл бояуды құрайды. Бұл реакция бұрын гликогендік бояу деп аталатын периодты қышқыл-шифф (PAS) бояуы ретінде белгілі.
Эксперимент әдісі
Материалдар:Целлюлоза ацетатымембран, электрофорез аппараты(DYCP-38C және қуат көзі DYY-6C ), Жоғары үлгіні жүктеу құралы(тамшуыр), спектрофотометр, колориметриялық кюветалар, буферлер.
Буфер:
(1) рН 8,6 TEB буфері: 10,29 г Tris, 0,6 г ЭДТА, 3,2 г бор қышқылын өлшеп, 1000 мл тазартылған суды қосыңыз.
(2) Борат буфері: 6,87 г борак пен 5,56 г бор қышқылын өлшеп, 1000 мл тазартылған суды қосыңыз.
Процедура:
PГемоглобин ерітіндісін қалпына келтіру
Антикоагулянт ретінде құрамында гепарин немесе натрий цитраты бар 3 мл қан алыңыз. 10 минут бойы 2000 айн/мин центрифугалаңыз және плазманы тастаңыз. Эритроциттерді үш рет физиологиялық физиологиялық ерітіндімен жуыңыз (750 айн/мин, әр жолы 5 минут центрифугалау). 10 минут бойы 2200 айн/мин центрифугалаңыз және үстіңгі затты тастаңыз. Бірдей мөлшерде тазартылған суды қосыңыз, содан кейін төрт хлорлы көміртегінің 0,5 есе мөлшерін қосыңыз. 5 минут бойы қатты шайқаңыз, содан кейін кейінірек пайдалану үшін жоғарғы Hb ерітіндісін жинау үшін 2200 айн/мин жылдамдықпен 10 минут бойы центрифугалаңыз.
Мембрананы сулау
Целлюлоза ацетаты мембранасын 3 см × 8 см өлшемді жолақтарға кесіңіз. Оларды рН 8,6 TEB буферіне толығымен қаныққанға дейін жібітіңіз, содан кейін алып тастаңыз және сүзгі қағазымен құрғатыңыз.
Белгілеу
Тамшуырды пайдаланып, 10 мкл гемоглобин ерітіндісін тігінен целлюлоза ацетаты қабықшасына (кедір-бұдыр жағы) шетінен 1,5 см қашықтықта орналастырыңыз.
Электрофорез
Борат буферінің ерітіндісін электрофорез камерасына құйыңыз. Целлюлоза ацетаты қабықшасын дақ жағымен камераның катодтық ұшына қойыңыз. 200 В кернеуінде 30 минут бойы іске қосыңыз.
Элюция
HbA және HbA2 аймақтарын кесіп, оларды бөлек пробиркаларға салып, сәйкесінше 15 мл және 3 мл тазартылған су қосыңыз. Гемоглобинді толығымен элюциялау үшін ақырын шайқаңыз, содан кейін араластырыңыз.
Колориметрия
Элюция ерітіндісі үшін тазартылған суды пайдаланып сіңіруді нөлге келтіріп, сіңіруді 415 нм-де өлшеңіз.
Есептеу
HbA2(%) = HbA2 түтігінің сіңірілуі / (HbA түтігінің сіңірілуі × 5 + HbA2 түтігінің абсорбциясы) × 100%
Эксперимент нәтижелерін есептеу
pH 8,6 TEB буферінің целлюлоза ацетаты электрофорезі үшін анықтамалық диапазон: HbA > 95%, HbA2 1%-3,1%
Ескертпелер
Электрофорез уақыты тым ұзақ болмауы керек. Электрофорез кезінде целлюлоза ацетаты қабықшасы кеуіп кетпеуі керек. HbA және HbA2 анық бөлінген кезде электрофорезді тоқтатыңыз. Ұзақ электрофорез жолақты диффузияны және бұлыңғырлықты тудыруы мүмкін.
Тым көп үлгіні пайдаланудан аулақ болыңыз. Шамадан тыс гемоглобин сұйықтығы жолақтың бөлінуіне немесе жеткіліксіз бояуға әкелуі мүмкін, нәтижесінде HbA деңгейі жалған көтеріледі.
Целлюлоза ацетаты мембранасының ақуыздармен ластануын болдырмаңыз.
Ток тым жоғары болмауы керек; әйтпесе гемоглобин жолақтары бөлінбеуі мүмкін.
Бақылау құралы ретінде әрқашан қалыпты адамдардан алынған үлгілерді және қажетті белгілі қалыпты емес гемоглобиндерді қосыңыз.
Beijing Liuyi Biotechnology компаниясы үлгі болып табылатын гемоглобин электрофорезіне арналған кәсіби электрофорез цистернасын шығарады.DYCP-38Cцеллюлоза ацетаты мембраналық электрофорез цистернасы және целлюлоза ацетаты мембраналық электрофорез цистернасы үшін электрофорезді қуат көзінің екі моделі бар.DYY-2CжәнеDYY-6Cнәр беруші.
Сонымен қатар, Beijing Liuyi Biotechnology тұтынушыларға целлюлоза ацетаты мембранасын ұсынады және целлюлоза ацетаты мембранасының өлшемін реттеуге болады. Бізден үлгілер мен қосымша ақпаратты сұрауға қош келдіңіз.
Beijing Liuyi брендінің Қытайда 50 жылдан астам тарихы бар және компания бүкіл әлем бойынша тұрақты және жоғары сапалы өнімдерді ұсына алады. Жылдар бойы даму арқылы ол сіздің таңдауыңызға лайық!
Біз қазір серіктестерді іздейміз, OEM электрофорез цистернасы да, дистрибьюторлар да құпталады.
Егер сізде біздің өнімдерді сатып алу жоспары болса, бізге хабарласудан тартынбаңыз. Сіз бізге электрондық пошта арқылы хабарлама жібере аласыз[электрондық пошта қорғалған]немесе[электрондық пошта қорғалған], немесе бізге +86 15810650221 нөміріне қоңырау шалыңыз немесе Whatsapp +86 15810650221 немесе Wechat қосыңыз: 15810650221
Жіберу уақыты: 20 қыркүйек 2023 ж